本发明公开了一种检测传染性脾肾坏死病毒的抗体及其制备和应用;所述检测传染性脾肾坏死病毒抗体为纯化的兔抗ISKNV-23P8多克隆抗体,是以含有序列号为SEQ ID NO:1的一段氨基酸残基为表位抗原,获得特异性识别ISKNV-23P8的多克隆抗体。该抗体用于检测传染性脾肾坏死病毒,具有特异性。本发明所述的传染性脾肾坏死病毒免疫荧光检测试剂盒及传染性脾肾坏死病毒感染印片非诊断性的免疫荧光快速检测方法具有特异性好、操作简单、快速、灵敏的特点,较PCR方法有明显优势,全部操作可在1.5小时内完成,可用于各种易感鱼类养殖过程中的ISKNV感染检测。