本发明涉及一种通过核苷酸序列优化使破伤风毒素受体结合区Hc在大肠杆菌中获得高效可溶性表达的方法。根据国内破伤风梭菌C.Tetani强毒株CMCC64008株的测序结果，对破伤风毒素受体结合区Hc序列进行分析优化，优化后的序列如SEQ ID No.1，其编码的蛋白序列如SEQ ID No.2。合成后的Hc基因经双酶切后连接入表达载体pET32a(+)中，重组Hc在大肠杆菌中获得了可溶性高表达，目的蛋白占碎菌上清总蛋白的约46％。经QFF柱、苯基疏水柱和SP柱三步纯化后，目的蛋白纯度可达95％以上，得率在300mg/L以上。通过本发明的方法制备的重组蛋白具有很好的免疫原性，能够诱导小鼠产生高滴度保护性抗体，抵御高剂量致死毒素的攻击。本发明在破伤风毒素重组亚单位疫苗Hc的大规模高效制备中具有广阔的应用前景。
