破伤风毒素受体结合区Hc在大肠杆菌中的高效表达及应用

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专利权人:

中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所

发明人:

陈薇,于蕊,侯利华,于长明,刘树玲,任军,房婷

申请号：

CN200910135972.0

公开号：

CN101880675B

申请日:

2009.05.07

申请国别(地区):

CN

年份:

2012

代理人:

摘要：

本发明涉及一种通过核苷酸序列优化使破伤风毒素受体结合区Hc在大肠杆菌中获得高效可溶性表达的方法。根据国内破伤风梭菌C.Tetani强毒株CMCC64008株的测序结果，对破伤风毒素受体结合区Hc序列进行分析优化，优化后的序列如SEQ ID No.1，其编码的蛋白序列如SEQ ID No.2。合成后的Hc基因经双酶切后连接入表达载体pET32a(+)中，重组Hc在大肠杆菌中获得了可溶性高表达，目的蛋白占碎菌上清总蛋白的约46％。经QFF柱、苯基疏水柱和SP柱三步纯化后，目的蛋白纯度可达95％以上，得率在300mg/L以上。通过本发明的方法制备的重组蛋白具有很好的免疫原性，能够诱导小鼠产生高滴度保护性抗体，抵御高剂量致死毒素的攻击。本发明在破伤风毒素重组亚单位疫苗Hc的大规模高效制备中具有广阔的应用前景。

来源网站：

中国工程科技知识中心

来源网址：

http://www.ckcest.cn/home/