一种从林蛙皮肤分泌物中分离的抗菌肽及其制备方法,属于生物医学和生物技术领域,其特征是:其氨基酸序列为SEQ ID No.1:Phe-Leu-Pro-Phe-Phe-Ala-Ala-Cys-Ala-Ile-Thr-Lys-Lys-Cys,分子量为1556.8道尔顿。其制备方法是:1)提取皮肤分泌物:采用活体林蛙,用10伏稳压间断性刺激蛙的耳后腺及背部,分泌液收集,备用;2)分离纯化:超速离心过滤收集滤液。进行液相色谱分离。溶液A为三氟乙酸,溶液B为三氟乙酸;色谱柱使用前用溶液A平衡,柱子平衡后将滤液加到柱子上,上样量2mL/次,然后加入溶液B,收集具有最佳抗菌活性的峰。利用反相高效液相色谱对其进一步分离。有益效果是:对大肠杆菌和葡萄球菌具有较强抗性,而且对于临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌也具有抑制作用。本发明的抗菌肽对MRSA具有抑制作用,由于其抗菌机制的特殊性,不会产生耐药性,可成为抗临床耐药菌株乃至超级细菌的新型抗菌药物。