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猪外周血单核淋巴细胞PD-1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用
- 专利权人:
- 新乡学院
- 发明人:
- 王选年,岳锋,朱艳平,冯春花,张艳芳,孙国鹏,李鹏,张万方,杨媛,王爱国,李博文,王军,李鹏
- 申请号：
- CN201410102841.3
- 公开号：
- CN103966314B
- 申请日:
- 2014.03.19
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2016
- 代理人:
- 张爱军
- 摘要：
- 本发明属于分子病理学与免疫学技术领域，涉及猪外周血单核淋巴细胞PD-1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用。通过采集猪外周血单核淋巴细胞的总RNA，将总RNA反转录成cDNA；采用普通PCR扩增PD-1目的基因片段，经琼脂糖凝胶电泳检测，并回收纯化；将PD-1目的基因片段与pMD 18-T载体连接，转化至感受态细胞DH5α中，提取重组质粒；经克隆筛选后进行测序分析，选取与目的基因片段相同序列的阳性质粒作为标准品质粒，按拷贝浓度绘制成标准曲线；根据荧光信号变化及标准曲线测出PD-1的基因丰度。本发明的猪PD-1基因丰度实时检测方法具有检测通量高、敏感性高、特异性强、操作简便、成本低及定量准确等优点。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
