本发明提供用于检测大肠杆菌四种常见耐药基因的组合物,包括引物对SEQ ID NO.1/2、SEQ ID NO.3/4、SEQ ID NO.5/6和SEQ ID NO.7/8。在此基础上进一步建立mPCR-DHPLC/电泳检测试剂盒及方法,以检测食品中的产CTX-M-1/CTX-M-9/OXA型ESBLs大肠杆菌及耐氨基糖苷类抗生素大肠杆菌。所建立的方法在一次检测中即可同时高特异性、高灵敏度地完成对样品中的大肠杆菌blaCTX-M-1、blaCTX-M-9、blaOXA、aadA四种耐药基因的检测,方法耗时短,操作简捷,并具有快速高通量等优点,可以节省大量的劳力和财力,适合快速检测的要求,满足了食品中微生物检测迅速准确的需求。