本发明涉及一种重组虎纹克胰肽载体及其制备方法和用途。重组虎纹克胰肽载体包括1或1个以上拷贝虎纹克胰肽,虎纹克胰肽的碱基序列如SEQ ID NO:9所示。其制备方法为:获得虎纹克胰肽基因;以获得的虎纹克胰肽基因为模板,进行扩增,酶切,连接,得到1个拷贝数的虎纹克胰肽重组载体;将1个拷贝数的虎纹克胰肽重组载体进行酶切连接,再以连接产物为扩增模板,进行第二次扩增,所得到的扩增产物与载体双酶切后进行连接得到2个拷贝数的虎纹克胰肽重组载体;重复上述步骤,依次得到2个以上拷贝数的虎纹克胰肽重组载体。本发明的重组虎纹克胰肽载体表达量高、制备方法简单,与天然提取的虎纹克胰肽在生物活性上无明显差异。