本发明提供用于检测抗ALS抑制剂类除草剂播娘蒿的特异性PCR引物对,包括用于特异性扩增播娘蒿B-ALS-1基因的引物对(Seq ID No.1-2)以及用于特异性扩增播娘蒿B-ALS-2基因的引物对(Seq ID No.3-4)。采用该引物的PCR检测方法具有极好的特异性和灵敏性,经特异性试验证明(图1、2)能够将播娘蒿的两个ALS基因扩增出来。由于PCR方法操作简便快捷,基于对核苷酸的检测,当季就可以取样检测,从取样到出结果仅需2~4天。其灵敏度和特异性能够实现对田间疑似抗ALS抑制剂播娘蒿的快速鉴定和突变位点的确认,从而指导生产实践中抗性杂草的科学治理。