本发明属于兽医微生物学和动物传染病技术领域。具体涉及副猪嗜血杆菌的一个具有免疫原性蛋白基因的分离、克隆以及它编码的蛋白在疫苗和诊断中的应用。本发明从副猪嗜血杆菌的强毒株SH0165菌株中分离得到一个新的具有免疫原性的蛋白基因pilA;它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示,编码150个氨基酸。该基因的编码产物为一种新的具有免疫原性蛋白PilA;该蛋白PilA对仔猪感染副猪嗜血杆菌0165能提供有效的免疫保护力。本发明还包括表达免疫原性蛋白基因pilA的大肠杆菌重组菌DH5α/Hps-pilA的制备,该重组大肠杆菌菌已保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC),其保藏编号为CCTCC NO:M209303。