本发明涉及一种含长雄野生稻启动子的可恢复水稻OsCYP704B2突变体雄性育性的载体及应用。本发明所述长雄野生稻OlCYP704B2基因启动子如SEQ ID NO.1所示,由该启动子驱动的、经序列优化的水稻OsCYP704B2基因表达盒如SEQ ID NO.4所示。本发明提供的启动子能够驱动基因在植物花药中高效地表达;本发明提供的水稻OsCYP704B2基因表达盒能够实现OsCYP704B2基因在上述启动子的驱动下在花药中高水平表达,完全恢复由OsCYP704B2功能缺失导致的水稻雄性不育,并且具有高度的遗传稳定性,可用于水稻雄性育性的恢复或制备水稻雄性核不育保持系和不育系。