本发明涉及一种抗GITR/CTLA-4双特异性抗体及其制备方法和用途,所述双特异性抗体的轻链双可变区的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:10;重链双可变区的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:12。所述双特异性抗体在拮抗T细胞中CTLA-4抑制信号通路的同时,还能够激活Treg细胞中的GITR信号通路,不但解除效应型T细胞自身的抑制信号,增强CD4+T细胞和CD+8T细胞的活性,并且消除Treg细胞对效应型T细胞的抑制作用,从而最大程度地激活效应型T细胞,增强针对肿瘤细胞的免疫应答反应。