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方便克隆长片段DNA且稳定遗传的质粒及其构建方法和应用
- 专利权人:
- 四川农业大学
- 发明人:
- 孔庆科,韩月,刘青,赵新新,刘琼,易洁,位玉南
- 申请号：
- CN201510215582.X
- 公开号：
- CN104774835A
- 申请日:
- 2015.04.30
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2015
- 代理人:
- 胡琳梅
- 摘要：
- 本发明提供了方便克隆长片段DNA且稳定遗传的质粒的构建方法，该方法包括如下步骤：1）扩增带有Sbf I和Not I酶切位点的T1T2-pSC101-asd片段；2）扩增带有Sbf I 和Not I酶切位点的TRP1-ARS4/CEN5-Spec片段；3）消化步骤1）和2）所得的片段；4）回收T1T2-pSC101-asd片段和带有相同黏性末端的TRP1-ARS4/CEN5-Spec片段；5）连接步骤4）所得片段；6）将步骤5）所得连接产物转化入DH5α感受态细胞中，过夜培养；7）挑取单菌落培养后，提取质粒，经酶切消化、电泳鉴定后，回收获取重组质粒DNA。本发明还公布了由上述方法得到的质粒及其在同时容纳多个DNA片段用于长片段DNA或基因簇组装并稳定表达的应用。本发明质粒为低拷贝质粒，可实现含长片段DNA的质粒从酵母向原核宿主中转化和稳定表达。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
