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柑橘溃疡病菌hfq基因无标记缺失突变体的筛选方法
- 专利权人:
- 中国农业科学院柑桔研究所
- 发明人:
- 王雪峰,严玉萍,刘雪禄,邹华松
- 申请号：
- CN201710019226.X
- 公开号：
- CN106754606A
- 申请日:
- 2017.01.11
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2017
- 代理人:
- 邹晓艳
- 摘要：
- 本发明公开了一种柑橘溃疡病菌hfq基因无标记缺失突变体的筛选方法包括步骤：(1)提取柑橘溃疡病菌DNA；(2)缺失hfq基因的重组自杀质粒载体的构建：A、以引物Hfq‑up‑F、Hfq‑up‑R，Hfq‑down‑F、Hfq‑down‑R分别扩增柑橘溃疡病菌hfq基因上、下游侧翼序列；B、回收PCR片段；C、将回收产物分别与载体pEASY‑T1vector连接；D、连接产物分别转化大肠杆菌；E、提取阳性克隆质粒；F、双酶切上/下游T‑载体重组质粒、pK18mobSacB；G、酶切后产物连接，连接液转化DH5α大肠杆菌；(3)将重组自杀质粒载体转化柑橘溃疡病菌；(4)蔗糖培养基法筛选突变体。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
