本发明整合了错配扩增突变分析PCR(MAMA-PCR)和多重PCR技术,提供了一种快速检测由于核苷酸点突变引起的耐喹诺酮类抗生素空肠弯曲杆菌的方法及试剂盒。本发明所提供的试剂盒包括具有序列表中SEQ ID №:1-5、SEQ ID №:7所示的核苷酸序列的引物组合物和具有序列表中SEQ ID №:1-6所示核苷酸序列的质控组引物组合物。本发明提供的检测方法及试剂盒可快速从疑似菌中鉴定出耐喹诺酮类抗生素的空肠弯曲杆菌,简化了以菌种鉴定和药敏试验为代表的传统检测方法的复杂程序,具有良好的特异性和灵敏度,非常适合基层一线用于快速检测疑似菌,继而提供准确的用药指导。