本发明公开了一种塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC抗体的ELISA检测试剂盒。该试剂盒包括塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC抗原包被的酶标板、阳性对照血清、阴性对照血清、酶标抗体,样品稀释液,显色液、终止液以及浓缩洗涤液。所述塞尼卡谷病毒非结构蛋白3ABC的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所述的试剂盒使用原核表达系统表达的非结构蛋白3ABC抗原包被反应板,抗原用量少,可以高效地检测猪血清中是否存在塞尼卡谷病毒,且与猪水疱病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒‑2型不反应。本发明试剂盒特异性好、敏感、高效,具有良好的市场前景。