本发明公开了一种基于蛋白空间结构设计的猪瘟病毒截短E2蛋白及其应用。本发明根据牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的晶体结构,模拟出猪瘟病毒E2蛋白的空间结构并对其进行截短表达,截短蛋白E2B/C/D/A的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示,其保留了E2蛋白完整的抗原性、且与牛病毒性腹泻病毒抗体无交叉反应。本发明进一步构建了稳定表达截短蛋白E2B/C/D/A的CHO细胞系,其微生物保藏编号为CGMCC No.14722。本发明还公开了一种用于猪瘟病毒抗体检测的间接ELISA试剂盒,其中包被抗原为猪瘟病毒截短蛋白E2B/C/D/A,该试剂盒能够特异性检测猪瘟病毒抗体,特异性、敏感性和重复性好。