Disclosed herein are recombinant adenoviruses having one or more nucleotide sequences inserted between two viral transcription units, agents comprising recombinant adenoviruses, and methods of treatment using recombinant adenoviruses. In some embodiments, one or more nucleotide sequences are inserted at the IX-E2 insertion site and / or at the L5-E4 insertion site.2개의 바이러스 전사 단위 사이에 삽입된 1개 이상의 뉴클레오티드 서열을 갖는 재조합 아데노바이러스, 재조합 아데노바이러스를 포함하는 제제, 및 재조합 아데노바이러스를 사용하는 치료 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 뉴클레오티드 서열이 IX-E2 삽입 부위 및/또는 L5-E4 삽입 부위에 삽입된다.