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METHOD FOR REFINING PROTEIN INCLUDING SELF-CUTTING CASSETTE AND USE THEREOF
专利权人:
주식회사 앱틀라스
发明人:
송병두,윤지선,최효정,김혜인,이응석
申请号:
KR1020157030691
公开号:
KR1018082230000B1
申请日:
2014.04.25
申请国别(地区):
KR
年份:
2017
代理人:
摘要:
The present invention relates to an auto-cleavage fusion protein comprising a target protein, a peptide consisting of an amino acid sequence of LPXTG, a Salts A cleavage functional domain and a tag in sequence from the amino terminus, a nucleic acid encoding the protein, an expression vector comprising the nucleic acid of the present invention, And to cells transformed with an expression vector of the invention. The present invention also relates to a method for purifying a target protein comprising culturing the above transformed cells, dissolving and purifying the transformed cells. The present invention relates to a self-cleavage fusion protein comprising a self-cleaving cassette consisting of a peptide consisting of a domain of Salts A cleavage function and an amino acid sequence of LPXTG, which is a recognition sequence thereof, It is very useful in that it can be completed in one refinement process. In particular, the presence of the target protein at the amino terminus enhances the ability of the fusion protein to self-cleave and the ability to bind the column, the ability to obtain the tagged protein at high purity, the cleavage- Is completed in a single step, the time and effort required for purification are drastically reduced, and since the loss of the obtained protein is reduced in one step, it is widely used in various fields requiring high purity and a large amount of protein . In particular, it is useful for preparing therapeutic antibody-drug conjugates.본 발명은 아미노 말단에서부터 목적 단백질, LPXTG의 아미노산 서열로 이루어지는 펩타이드, 솔테이즈 A 절단 기능 도메인 및 태그의 순서로 포함하는 자가절단 융합 단백질, 이를 코딩하는 핵산, 본 발명의 핵산을 포함하는 발현벡터, 및 본 발명의 발현벡터로 형질전환된 세포에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 형질전환된 세포를 배양하여 용해 및 정제하는 단계를 포함하는 목적 단백질의 정제방법에 관한 것이다. 본 발명은 솔테이즈 A 절단 기능 도메인과 이의 인식 서열인 LPXTG의 아미노산 서열로 구성되는 펩타이드로 이루어진 자가 절단 카세트를 포함하는 자가 절단 융합 단백질에 관한 것으로, 목적 단백질의 정제 및 태그 제거 과정을 별도의 과정이 아닌 한 번의 정제 과정으로 완료할 수 있다는 점에서 매우 유용하다. 특히, 목적 단백질의 위치가 아미노 말단에 존재함으로써 융합 단백질의 컬럼 결합 능력과 자가 절단 능력을 높인 점, 태그가 제거된 목적 단백질을 고순도로 얻을 수 있는 점, 절단-
来源网站:
中国工程科技知识中心
来源网址:
http://www.ckcest.cn/home/

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