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一种基于PiggyBac载体的CD-133-CAR-T系统构建方法
- 专利权人:
- 马晓冬
- 发明人:
- 马晓冬,刘明,林展雯,李浔,黄行许
- 申请号：
- CN201810926459.2
- 公开号：
- CN109022363A
- 申请日:
- 2018.08.15
- 申请国别(地区):
- CN
- 年份:
- 2018
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明涉及CD‑133‑CAR‑T系统构建技术,特别是涉及一种基于PiggyBac载体的CD‑133‑CAR‑T系统构建方法,其是通过设计合成CD‑133‑CAR基因片段,然后将CD‑133‑CAR基因片段连接到Piggybac载体上得到Piggybac‑CAR‑CD‑133,再将Piggybac‑CAR‑CD‑133转入大肠杆菌中进行扩增,然后从大肠杆菌中提取质粒,并加入到人血清中分离的淋巴细胞中进行扩展培养,采用Nucleofector细胞转染系统转染共转染质粒Piggybac‑CAR‑CD‑133和Piggybac Transposase到T淋巴细胞,得到带有CD‑133‑CAR基因片段的T淋巴细胞。本发明采用非病毒类载体PiggyBac系统,避免了使用病毒载体存在的安全隐患,具有更高的安全性和有效性,更加适用于临床治疗;采用的Nucleofector细胞核技术,能够将外源基因直接导入到细胞核,克服了脂质体转染和普通电穿孔,必须依赖细胞分裂时才有可能使外源基因入核表达的缺陷,细胞具有更高的存活率和增殖效率。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
