本发明公开了一种用于检测土壤中小麦纹枯病菌的RPA引物、探针、试剂盒及检测方法，属于生物安全技术领域；所述的RPA引物基于小麦纹枯病菌ITS序列设计，RPA引物序列如SEQ ID No：1和2所示；所述的PRA探针根据所述的RPA引物扩增区域设计，其序列大小为45bp‑54bp，其5’端用FAM标记，3’端用C3‑Spacer修饰，且在RPA探针的序列中间距5’端的33bp处进行THF修饰。本发明还提供含有所述的RPA引物和探针的试剂盒。本发明进一步提供基于所述的RPA引物和探针建立的RPA检测方法，首次将RPA技术应用到土壤中小麦纹枯病菌的分子检测，其兼具特异性强、灵敏度高、实用性好、对仪器设备要求较低的特点，为小麦纹枯病的早期诊断、病害防治和农药减量使用提供新方法。
