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一种基因敲除选育rmnd5b基因缺失型斑马鱼的方法
专利权人:
湖南师范大学
发明人:
邓云,潘琪,吴秀山,袁婺洲,欧阳诗
申请号:
CN201711384128.2
公开号:
CN108018316A
申请日:
2017.12.20
申请国别(地区):
中国
年份:
2018
代理人:
李大为
摘要:
本发明公开了一种基因敲除选育rmnd5b基因缺失型斑马鱼的方法,属于基因敲除领域。该方法通过CRISPR/Cas9基因敲除靶位点设计,构建gRNA表达载体以及gRNA体外合成,斑马鱼胚胎进行显微注射,检测靶位点的有效性,注射两个月之后,进行剪尾鉴定,对目的序列进行TA克隆,质粒进行Sanger测序获得可遗传的斑马鱼突变体的F1代,从F1代突变体中挑选相同突变的雌鱼和雄鱼,杂交获得斑马鱼突变体的F2,从中挑选出F2代纯合子,进行F3代纯系遗传得到rmnd5b基因缺失型斑马鱼品系。本发明方法脱靶率较低,且研究rmnd5b基因的缺失与其他器官的发育的相关性,具有很好的医学研究价值。
来源网站:
中国工程科技知识中心
来源网址:
http://www.ckcest.cn/home/

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