用于预防羊弓形虫感染的核苷酸序列、载体、蛋白、疫苗和制备方法及其应用。本发明提供一种核苷酸序列,包括如下核苷酸序列:(1)SEQ ID NO.1中所示的核苷酸序列;(2)与(1)中所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列;(3)与上述(1)或(2)核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰的核苷酸序列。本发明提供一种疫苗,将弓形虫抗原双酶切后连接pET28a表达载体,转化入BL21(DE3)工程菌,诱导其高效表达,纯化后得到可溶性蛋白,最后添加206佐剂制备而成。本发明制备的亚单位灭活疫苗具有较强的细胞免疫和体液免疫效果,能够诱导机体的先天性免疫应答,分泌各种细胞炎性因子,从而有效地预防弓形虫病。