本发明提供了一种双T‑DNA载体pBID‑RT Enhanced及其构建方法和应用,涉及转基因技术领域;所述载体以pCAMBIA3300的质粒为基础,包含两个反向独立的T‑DNA区,第一T‑DNA区的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,第二T‑DNA区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。利用所述载体可降低T‑DNA整合到连锁位点的频率,T1代和F1代中无标记转基因植株占76.92%;利用所述载体可获得抗草铵膦转基因油菜以及既抗草铵膦又抗草甘膦转基因油菜。利用本发明的所述载体可以成功并且高效的生产无标记转基因甘蓝型油菜植株,并创造两种抗除草剂品种。