本发明公开了一种毒力减弱的NSP4突变基因,其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了一种包含该毒力减弱的NSP4突变基因的重组质粒,还公开了一种包含该毒力减弱的NSP4突变基因的重组牛轮状病毒,构建方法为:将重组质粒与pcDNA3.1-T7RNAP重组质粒共转染恒河猴肾细胞MA104,然后接种野生型牛轮状病毒,利用反向遗传技术拯救变异病毒,即得毒力减弱的重组牛轮状病毒。本发明的重组牛轮状病毒,为国内外首次利用反向遗传技术获得的毒力减弱的BRV病毒株,与传统获得减毒株方法比较,本发明利用反向遗传技术并结合RNA干涉方法,成功获得毒力减弱的牛轮状病毒,为BRV减毒疫苗侯选株的获得提供了快捷途径。