本发明提供一种衍生自肉食杆菌素的抗菌肽及其制备方法和应用,抗菌肽WRW,其序列如SEQ ID No.1所示。本发明通过截取肉食杆菌素的羧基末端的17个氨基酸,获得的一条肽WGW,将肽WGW中的中性甘氨酸、带负电的谷氨酸及极性不带电的谷氨酰胺和天冬酰胺替换成带正电荷的精氨酸;然后将肽链中的丝氨酸、苏氨酸和缬氨酸替换成亮氨酸,得到肽WRW;本抗菌肽具有高效的抑菌作用,而且具有很低的溶血活性和真核细胞毒性,该抗菌肽在128μmol/L浓度下造成4.07%的红细胞溶血,未能引起10%的红细胞溶血以及小鼠巨噬细胞RAW264.7的存活率达到89.57%,提高了其成为抗生素替代物的发展潜力。