本发明涉及一种烟草GCN2启动子,其核苷酸序列为:(1)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列;或(2)与(1)限定的核苷酸序列中至少具有90%同源性的核苷酸序列。本发明还涉及烟草GCN2启动子在启动目的基因表达中的应用,以及应用方法。本发明启动子可以驱动GUS基因的表达,可以作为烟草生物反应器外源基因所用的表达元件;该序列位于GCN2上游,能启动GCN2表达,同时在序列上存在多个植物激素及胁迫位点,通过激素或胁迫处理调控GCN2表达,控制蛋白合成。本发明有助于促进人们对烟草应答胁迫机理的研究,在农业和医学领域具有广阔的应用空间和市场前景。