本发明属于生物技术领域,具体涉及一种小麦种子皮层特异启动子pTaWG04的分离及其应用。该启动子包含1571bp碱基,其碱基序列如SEQ ID No.1所示。该启动子驱动下游基因TaWG04的表达,或者驱动外源基因在小麦种子皮层中特异表达。本申请首次克隆获得了pTaWG04启动子,并对其生物学信息进行了初步分析,认为其属于一个种子特异性启动子。进一步通过Real‑time PCR对其驱动的下游基因TaWG04进行定量分析,结果进一步证明,pTaWG04是一个种子皮层特异启动子。而通过重组载体构建及GUS染色实验,结果证明,该启动子可驱动外源基因在种子皮层中特定表达。