本发明涉及一种过表达结核分枝杆菌Rv3586的重组卡介苗菌株及其应用。将含结核分枝杆菌Rv3586编码基因的质粒转化入卡介苗,筛选获得菌株称为Bacillus calmette‑Guerin rBCG‑DisA,简称为rBCG‑DisA,保藏编号为:CCTCC M 2016335。过表达Rv3586的重组卡介苗rBCG‑DisA兼具靶抗原和卡介苗的双重优势,单独免疫或联合结核分枝杆菌Ag85B‑ESAT6亚单位疫苗加强免疫,可诱导正常和感染小鼠更强的免疫应答,提高机体抗分枝杆菌的保护力,因而具有良好的应用前景。