Die Erfindung betrifft einen mitochondrialen Expressionsvektor umfassend ein zu exprimierendes Gen und/oder einen Selektionsmarker, und einen mitochondrialen Promotorbereich, sowie ein Verfahren zum Einbringen einer zu exprimierenden DNA in Mitochondrien von Säugerzellen, wobei das Verfahren die Schritte umfasst: (i) Konstruktion eines mitochondrialen Expressionsvektors oder eines mitochondrialen Genoms, (ii) reversible Induktion von Megamitochondrien und (iii) Transfektion der Megamitochondrien mittels einer physikalischen Transfektionsmethode.The invention relates to a mitochondrial expression vector comprising a gene to be expressed and/or a selection marker and a mitochondrial promoter region, and a method for inserting a DNA to be expressed into mitochondria of mammalian cells, wherein the method comprises the steps: (i) construction of a mitochondrial expression vector or a mitochondrial genome, (ii) reversible induction of megamitochondria and (iii) transfection of the megamitochondria by means of a physical transfection method.L'invention concerne un vecteur d'expression mitochondriale comprenant un gène à exprimer et/ou un marqueur de sélection et une région promotrice mitochondriale, ainsi qu'un procédé d'introduction d'un ADN à exprimer dans des mitochondries de cellules de mammifères. Le procédé comprend les étapes suivantes : (i) construction d'un vecteur d'expression mitochondriale ou d'un génome mitochondrial, (ii) induction réversible de mégamitochondries, et (iii) transfection des mégamitochondries en utilisant une méthode de transfection physique.