本发明公开了一种人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体、其制备方法及应用。本发明运用噬菌体表面呈现技术,采集乙肝疫苗免疫后具有高滴度表面抗体者的外周血淋巴细胞,通过基因工程手段构建了人源抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体文库,并筛选获得特异抗乙肝病毒表面抗原基因工程抗体Fab段。获得的Fab段抗体命名为HBFab21。HBFab21轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示,其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明不仅为阻止乙肝病毒感染,同时也为其治疗的研究奠定了基础;以此为基础,可以获得具有中和乙肝病毒感染的抗体产物,制成临床上用于乙肝病毒相关肝病的药物或诊断试剂中的应用。