SOLUTION: A second closing member 18 forming an isolation space S3 surrounding an aperture O arranged in an agent liquid tank 3 (second sterilization device) having a second sterile room S2 formed per a first closing member 15 is arranged in a first sterile room S1 of an isolator device 2 (first sterilization device). The isolation space S3 is formed by the second closing member 18, and a second sterile room sterilization process for sterilizing the isolation space S3 and the second sterile room S2 communicating via the aperture O is conducted at a state that the expansion packing 14 (seal means) is apart from the first closing member 15. The expansion packing 14 is adhered to the first closing member 15, and a first sterile room sterilization process for sterilizing the first sterile room S1 is conducted at a state with opening from isolation by the second closing member 18.EFFECT: Higher level sterilization can be done.SELECTED DRAWING: Figure 6【解決手段】 アイソレータ装置2(第1無菌装置)の第1無菌室S1の内部に、第1閉鎖部材15ごと第2無菌室S2の形成された薬液タンク3(第2無菌装置)に設けられた開口部Oを囲繞する隔離空間S3を形成する第2閉鎖部材18を設ける。 上記第2閉鎖部材18によって上記隔離空間S3を形成し、かつ上記膨張パッキン14(シール手段)を第1閉鎖部材15から離隔させた状態で、上記開口部Oを介して連通した上記隔離空間S3および第2無菌室S2を滅菌する第2無菌室滅菌工程を行う。 上記膨張パッキン14を第1閉鎖部材15に密着させるとともに上記第2閉鎖部材18による隔離から開放させた状態で第1無菌室S1を滅菌する第1無菌室滅菌工程を行う。【効果】 より高度な滅菌を行うことができる。【選択図】 図6