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一种表达内切葡聚糖酶的重组大肠杆菌的构建方法
- 专利权人:
- 天津强微特生物科技有限公司
- 发明人:
- 杨雪宁,徐彬,王巍,郑春阳
- 申请号：
- CN201310518839.X
- 公开号：
- CN104561071A
- 申请日:
- 2013.10.29
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2015
- 代理人:
- 摘要：
- 一种表达内切葡聚糖酶的重组大肠杆菌的构建方法，属于基因工程领域。从超嗜热古菌即掘越氏火球菌中通过PCR扩增得到内切-β-1,4-葡聚糖酶基因SEQIDNo.1，接着去除类SD序列并采用拼接PCR，获得了不包含SD序列内切-β-1,4-葡聚糖酶基因ph1171-sgc-mut-sd,SEQIDNo.2，然后将其插入到大肠杆菌表达载体pET21a中，得到重组载体pET21a-ph1171-sgc-mut-sd,转化大肠杆菌工程菌株E.coliBL21(DE3)plys得到重组菌E.coliBL21(DE3)plys-pET21a-ph1171-sgc-mut-sd。由异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导，上述重组菌得到高效可溶性表达。通过加热变性处理和离心后，经SDS-PAGE检测重组酶纯度达到80%以上。该酶最适反应温度为95℃。该菌株适合用于纺织行业中降解天然结晶纤维素的过程。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
