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一种利用体细胞核移植技术生产转基因克隆水牛的方法
- 专利权人:
- 广西大学
- 发明人:
- 石德顺,陆凤花,罗婵,李楠,韦英明,刘庆友,李湘萍,蒋建荣
- 申请号：
- CN201110185317.3
- 公开号：
- CN102250954A
- 申请日:
- 2011.07.04
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2011
- 代理人:
- 黄永校
- 摘要：
- 一种利用体细胞核移植技术生产转基因克隆水牛的方法，是从水牛胎儿分离培养得到水牛胎儿成纤维(BFF)，再将携带新霉素抗性基因和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的转基因载体(pCE-EGFP-IRES-neo)通过电穿孔法导入BFF，并通过G418筛选获得转EGFP基因的BFF；而后，将转EGFP基因的BFF移植到去核的水牛卵母细胞构建克隆重构胚，经5μmol/L离子霉素处理5min，再用2mmol/L的6-二甲氨基嘌呤培养3h进行化学激活处理后，置于颗粒细胞单层共培养6-7d后获得转基因克隆囊胚。在倒置荧光显微镜下挑选表达EGFP的转基因克隆囊胚移植到受体水牛，经过妊娠足月后分娩获得转基因克隆犊牛。经紫外灯照射，这些转基因克隆水牛犊头部和四肢明显均表达EGFP标记基因，证明用本发明的方法可成功生产转基因克隆水牛。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
