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针对淀粉酶BLA的启动子文库及强启动子
- 专利权人:
- 湖北大学
- 发明人:
- 张桂敏,卢争辉,沈盼盼,周玉玲,马延和
- 申请号：
- CN201710956947.3
- 公开号：
- CN107699560A
- 申请日:
- 2017.10.16
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2018
- 代理人:
- 强红刚
- 摘要：
- 本发明涉及一种启动子文库，用于在枯草芽胞杆菌中高效表达淀粉酶BLA，所述文库的探针载体为整合型载体，以避免质粒拷贝数对文库表征的影响，在BLA表达框上下游均有强转录终止子，避免上下游遗传元件对BLA表达的影响，所述文库的构建方法包括寡核苷酸退火，IIs型限制性酶和连接酶同时酶切/酶连。为了提高探针载体整合效率及降低内源性淀粉酶AmyE的背景，在启动子文库转化枯草芽孢杆菌时，使用CRISPR/cas9系统在整合位点处引入DNA双链断裂。转化后涂布于底物平板，对水解圈大的转化子通过96孔板复筛，复筛后较强的转化子再通过摇瓶进一步复筛。经由上述步骤，得到比P43表达BLA更高效的启动子22个，其中7个杂合启动子的强度高于所有出发启动子。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
