本发明属于植物组培快繁技术领域,提供了一种铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)组培苗通过培养瓶驯化的方法。本发明所述方法包括以下步骤:选取成熟组织培养瓶苗;瓶苗遮阴预培养;瓶苗去琼脂、消毒;瓶苗晾干脱水;瓶苗再次入瓶内半开盖培养;最后移栽苗床基质中。本发明所述方法操作简单,成本低廉,有效地克服了铁皮石斛组培苗出瓶后易溃烂死亡,栽种成活率低的技术难题。使得组培苗在出瓶后较短的时间里,叶片基本形成完善的角质层,能很好地进行有效的光合作用,合成各种物质。经过本法驯化的组培苗,根系发达,叶片变厚,叶色深绿,茎变粗变硬,保持生长的连贯性。移栽后,成活率可达95%以上。