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一种基于CRISPR/Cas9系统对新疆野苹果基因多靶点定点突变的方法
- 专利权人:
- 中国科学院新疆生态与地理研究所
- 发明人:
- 张道远,张燕,周平,杨红兰,李小双
- 申请号：
- CN201910729291.0
- 公开号：
- CN110408652A
- 申请日:
- 2019.08.08
- 申请国别(地区):
- CN
- 年份:
- 2019
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明涉及一种基于CRISPR/Cas9系统对新疆野苹果基因多靶点定点突变的方法,该方法是由克隆MsPDS基因,对MsPDS基因的5个不同的外显子序列设计了sgRNA,并将含有编码所述sgRNA序列的DNA片段连接到pYLCRISPR/Cas9载体中去,转化新疆野苹果叶片外植体,获得定点编辑的愈伤组织及不定芽步骤完成,针对新疆野苹果MsPDS基因的不同外显子序列,选择了5个不同的靶向位点,设计了5个sgRNA,再将sgRNA构建到pYLCRISPR/Cas9载体中去;再通过农杆菌介导的遗传转化,获得了目标基因定点突变的愈伤组织和不定芽,产生了白化的性状。该方法操作简单,实验周期短,可利用CRISPR/Cas9系统对不同的单基因的多位点或多个基因的不同位点进行定点的改造,为新疆野苹果基因功能研究提供了新的方法和思路。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
