本发明公开了一种叶酸代谢相关基因MTHFR遗传变异检测试剂盒,该试剂盒用于鉴定rs1801133基因型,该试剂盒含有:1)正向和反向引物:正向引物为SEQ ID NO.1所示序列的核苷酸链或其互补链;反向引物为SEQ ID NO.2所示序列的核苷酸链或其互补链;2)PCR反应液:2x HRM PreMix。此外本发明还公开了上述试剂盒的应用。本发明以一个聚合酶链式反应,反应体系中包含特异性的正向和反向引物,通过实时荧光定量检测来判断基因型。本发明具有成本低、特异性强、敏感性高、操作简单快速、分型准确、结果易判读等优势,可用于临床上与叶酸代谢相关基因MTHFR遗传变异的检测,协助医生选用合适剂量的叶酸。