枯草芽孢杆菌表面展示氨肽酶的构建及协同水解大豆蛋白

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作   者：

袁晓黎;  李青云;  刘幽燕;  李进;  白雪;  唐爱星; 

作者机构：

广西大学化学化工学院; 

关键词：

枯草芽孢杆菌;  氨肽酶;  大豆蛋白;  表面展示;  协同水解; 

期刊名称：

化工进展

i s s n：

1000-6613

年卷期：

2024 年 43 卷 003 期

页   码：

1466-1473

摘   要：

氨肽酶是蛋白质深度水解的重要协同酶,但游离酶使用成本高且稳定性差,限制了其工业化应用.本研究利用表面展示技术将来源于铜绿假单胞菌GF31的氨肽酶基因Aps展示到Bacillus subtilis WB800N芽孢的表面,构建了一种易分离且稳定性好的新型全细胞生物催化剂.通过免疫荧光分析,证明氨肽酶在芽孢表面正确表达.在最适反应温度60℃、pH=9.0的条件下,氨肽酶活力最高可达75.61U/g芽孢.将表面展示氨肽酶协同碱性蛋白酶水解大豆蛋白,在60℃、碱性蛋白酶与表面展示氨肽酶加入比例为2∶1、水解pH先为10.0后为9.0的条件下,水解5.0%的大豆蛋白8h,水解度最高可达55.50%,分别是表面展示氨肽酶与碱性蛋白酶单独水解时的3.3倍、1.5倍.同时16种游离氨基酸含量大幅度提升,其中疏水性氨基酸亮氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸含量分别增加19.21mg/L、8.59mg/L和16.77mg/L,鲜味氨基酸谷氨酸、天冬氨酸含量增加13.98mg/L和4.11mg/L,说明表面展示氨肽酶在蛋白质的深度水解及对蛋白水解液脱苦、增鲜方面具有显著的作用,具有良好的工业应用前景.