马链球菌兽疫亚种荧光定量PCR检测方法的建立及在入境马匹回顾性检测分析中的应用

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作   者：

胡雨桐;  周学慧;  赵梦茹;  陈翔;  吴晓薇;  赵治国;  王艳;  赵光伟; 

作者机构：

中华人民共和国上海海关;  广州海关技术中心;  呼和浩特海关技术中心;  西南大学动物医学院; 

关键词：

荧光定量PCR;  马链球菌兽疫亚种;  马;  SYBR GreenⅠ; 

期刊名称：

中国兽医学报

i s s n：

1005-4545

年卷期：

2024 年 44 卷 008 期

页   码：

1735-1742

摘   要：

为建立一种针对马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subspecies zooepidemicus,SEZ)快速、特异、敏感的检测方法，并了解SEZ在入境我国马匹中的感染情况，试验首先根据SEZ标准菌株(ATCC 43079)的保守基因comB设计合成特异性引物，经PCR扩增后构建pMD19-T-comB重组质粒，以此为标准品模板建立基于SYBR GreenⅠ染料的荧光定量PCR检测方法(quantitative PCR,qPCR);进而利用所建方法对2018―2023年由荷兰、比利时、日本、德国、阿根廷和新西兰等6个国家入境我国口岸的477份马血清样本进行SEZ感染情况的检测分析。结果发现本试验所建立的qPCR检测方法特异性良好，仅对SEZ存在特异性扩增；敏感性试验表明该方法最低检测量为4.58×10～1 copies/μL;重复性试验检测结果显示批内重复性变异系数均小于0.5%,批间重复性变异系数均低于3.0%,表明重复性良好，稳定性高。回顾性检测分析显示2018年荷兰入境的共40份样本均为阴性(0/40);2019年比利时入境样本中检测到1份阳性(1/20),日本和德国入境样本均为阴性(0/36);2021年日本样本中3份为阳性(3/34),阿根廷1份为阳性(1/20),荷兰均为阴性(0/40);2022年荷兰76份样本均为阴性(0/76);2023年荷兰126份样本检出阳性样本5份(5/126),新西兰88份样本中检出阳性1份(1/88)。总计阳性样本11份，阳性率为2.31%(11/477),总体阳性率较低。结果说明，成功建立了用于检测SEZ的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法，其对我国出入境、口岸部门的快速检疫以及该病的流行病学调查等工作提供了必要的技术支撑。