基于TCID₅₀检测AAV9载体制品感染性滴度的方法

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作   者：

王聪;  李秀;  牛苗;  戴阳光;  董哲岳;  董小岩;  余双庆;  杨怡姝; 

作者机构：

北京五加和基因科技有限公司;  北京工业大学;  北京工业大学  ; 

关键词：

感染性滴度;  9型腺相关病毒载体;  半数组织培养感染剂量; 

期刊名称：

中国生物工程杂志

i s s n：

1671-8135

年卷期：

2021 年 010 期

页   码：

28-32

摘   要：

目的:建立一种基于半数组织培养感染剂量（median tissue culture infective dose,TCID50）检测9型腺相关病毒（adeno-associated virus type 9,AAV9）载体制品感染性滴度的方法。方法:利用含AAV2 rep和cap基因的1型单纯疱疹病毒（herpes simplex virus type1,HSV1）做为辅助病毒与梯度稀释的AAV9载体制品共同感染HEK-293细胞,培养48 h后用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q PCR）扩增AAV特异性反向末端重复序列（inverted terminal repeats,ITR）,根据阳性及阴性感染孔数,利用Krber法计算样品的TCID50。结果:采用携带增强绿色荧光蛋白报告基因的AAV9载体制品确定辅助病毒HSV1-rc最佳感染复数（multiplicity of infection,MOI）为5,AAV9-101的感染性滴度为1.6×109TCID50/m L。结论:对AAV9载体制品进行感染性滴度检测,且具有可重复性。