牛溶血性曼氏杆菌白细胞毒素、脂蛋白E和外膜蛋白A的免疫原性研究

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作   者：

李奕欣;  姜志刚;  于力; 

作者机构：

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊传染病研究创新团队; 

关键词：

牛溶血性曼氏杆菌;  白细胞毒素;  脂蛋白E;  外膜蛋白A;  免疫原性; 

期刊名称：

中国预防兽医学报

i s s n：

年卷期：

2021 年 007 期

页   码：

753-758

摘   要：

在应激条件下,溶血性曼氏杆菌（Mh）能够引起牛的纤维素性肺炎或胸膜肺炎,对全球养牛业危害严重,免疫接种是防控Mh病的主要手段。为了评价牛源A1型Mh脂蛋白E（PlpE）、外膜蛋白A（OmpA）以及白细胞毒素（LKT）的免疫原性,本研究分别将PlpE、OmpA以及LKT的毒力效应蛋白LKTA的编码基因克隆至原核表达载体pET-28a,并在大肠杆菌中表达,采用亲和层析或电洗脱的方法对重组蛋白进行提纯。将纯化的重组蛋白rPlpE、r OmpA和rLKTA分别或组合接种BALB/c小鼠,首次免疫14 d后采用相同方法加强免疫,分别于首次免疫后14 d、21 d、28 d和35 d采集小鼠血清。采用间接ELISA方法检测小鼠血清中针对Mh的特异性IgG抗体水平,结果显示各重组蛋白均能够诱导小鼠产生针对Mh的特异性IgG抗体,而rPlpE和rLKTA诱导的抗体水平明显高于r OmpA。采用牛淋巴细胞中和试验检测rLKTA免疫小鼠血清中针对LKT的中和抗体水平,结果显示rLKTA能够诱导小鼠产生高水平的中和抗体,二免后21 d小鼠血清中的平均中和抗体滴度可达363。以致死剂量的A1型Mh菌液对免疫小鼠进行攻击,结果显示rPlpE对小鼠的保护率为50%（2/4）,而rOmpA对小鼠无保护作用。综上所述,r LKTA和r PlpE能够诱导小鼠产生针对Mh的保护性免疫应答,是A1型Mh的优势保护性免疫原组分,本研究为全面了解牛源A1型Mh主要免疫保护性抗原以及Mh新型疫苗的研究奠定了实验基础。