沙冬青子叶原生质体瞬时表达体系的建立及其AmDREB1蛋白的亚细胞定位

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作   者：

楠迪娜;  薛敏;  唐宽刚;  任美艳;  王茅雁; 

作者机构：

内蒙古农业大学生命科学学院; 

关键词：

瞬时表达;  DREB转录因子;  亚细胞定位;  原生质体;  沙冬青; 

期刊名称：

植物科学学报

基金项目：

蒙古沙冬青4个寒旱诱导表达DREB基因的功能研究
蒙古沙冬青三个寒旱诱导表达NAC转录因子基因的功能研究

i s s n：

2095-0837

年卷期：

2018 年 04 期

页   码：

562-568

摘   要：

以沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus(Maxim.ex Kom.)Cheng f.)幼苗的子叶为材料,对其原生质体的分离、纯化和瞬时表达体系进行了研究。结果表明,子叶原生质体分离的最佳酶解液组成为CPW溶液+3.0%纤维素酶R-10+0.5%离析酶R-10+0.3%半纤维素酶+9.0%甘露醇(p H5.8);最佳酶解条件为室温、避光、40 r/min轻摇14 h。采用W5溶液作为漂洗液将酶解物稀释后进行过滤,将过滤液在4℃、700 r/min条件下离心5 min,所得纯化原生质体的产量约为2.50×106cells/g,活力达到90%;以纯化的原生质体作为受体,利用聚乙二醇(PEG)介导法成功将植物瞬时表达载体p BI-GFP导入其中,转化效率达到50.8%。利用本研究建立的原生质体瞬时表达体系,检测到沙冬青脱水应答转录因子Am DREB1定位于细胞核内。