羊口疮病毒E3L蛋白亚细胞定位及生物信息学分析

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作   者：

蒙泽菁;  房永祥;  贾怀杰;  高真贞;  陈国华;  何小兵;  景志忠;  王晓霞; 

作者机构：

兰州大学营养与食品卫生学研究所;  兰州大学公共卫生学院营养与食品卫生学研究所;  中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 

关键词：

生物信息学;  亚细胞定位;  羊口疮病毒;  基因克隆; 

期刊名称：

中国病原生物学杂志

i s s n：

1673-5234

年卷期：

2023 年 002 期

页   码：

141-146

摘   要：

目的 克隆羊口疮病毒020基因，构建其重组真核表达质粒并转染HeLa细胞，分析020基因编码E3L蛋白的亚细胞定位，分析该蛋白生物信息学特征。方法 提取羊口疮病毒基因组，PCR扩增020基因并构建重组真核表达质粒，转染HeLa细胞，采用Western blot检测其在该细胞中的表达，免疫荧光法检测该蛋白的亚细胞定位。利用DNAstar软件分析不同毒株ORFV E3L氨基酸序列特点及其遗传演化关系；利用SOMPA软件分析其二级结构；利用SignalP4.0软件预测信号肽；利用TMHMM2.0软件预测跨膜结构；利用NetPhos 3.1预测磷酸化位点；利用NetNGlyc-1.0预测糖基化位点；应用IDEB和SYFPEITHI预测ORFV E3L蛋白的抗原表位。结果 成功克隆得到ORFV 020基因，全长549 bp,编码183个氨基酸；亚细胞定位显示该蛋白定位于细胞核和细胞质。生物信息学分析ORFV E3L蛋白α螺旋约占40.44%、β折叠约占5.46%、延伸链约占16.94%、无规则卷曲约占37.16%;该蛋白无信号肽和跨膜结构，可能存在15个磷酸化位点，7个N-糖基化位点，5个B细胞线性表位，2个CTL表位，3个Th细胞表位，3个B细胞和CTL联合表位，3个B细胞和Th细胞联合表位。结论 ORFV E3L蛋白定位于细胞核和细胞质，含有多个抗原表位，可能具有免疫原性。该蛋白高度保守，具有成为优势保护性抗原的潜力。为进一步揭示ORFV E3L蛋白的功能奠定基础，为ORFV诊断方法的建立及疫苗的研制提供了理论依据。