大鼠细小病毒H-1株培养方法的建立

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作   者：

刘先菊;  佟巍;  张丽芳;  王艳蓉;  高子琪;  仉惠敏;  荣蓉;  刘云波; 

作者机构：

中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部实验动物检测中心; 

关键词：

大鼠胶质瘤细胞;  免疫荧光试验;  大鼠原代胚细胞;  血球凝集试验;  细小病毒; 

期刊名称：

中国实验动物学报

基金项目：

i s s n：

1005-4847

年卷期：

2011 年 19 卷 06 期

页   码：

495-498+561

摘   要：

目的建立用大鼠胶质瘤细胞系(Rat glial cell line C6)替代大鼠原代胚细胞(primary rat embryocells,RE)培养大鼠细小病毒(Toolan virus,H-1)的方法。方法 将0.8 mL H-1病毒接种C6细胞(75T培养瓶,细胞接种量为2×105/mL,培养过夜),待细胞病变CPE达++～+++时,用免疫荧光(FITC)鉴定所培养病毒的抗原,用血球凝集试验(HA)测定培养物上清效价,用DNA测序鉴定所培养的病毒,用96孔板培养法测定H-1病毒的TCID50。结果H-1在接种到C6细胞的第3～4天,细胞发生明显的病变,CPE可达++++,FITC鉴定呈H-1抗原阳性,病毒的培养上清中HA效价为1∶320。测序结果表明:该病毒序列与NCBI中H-1序列同源性达99%,确定为H-1病毒。收获的H-1的TCID50为103.2/0.1 mL。结论用大鼠胶质瘤细胞系(C6)可以替代大鼠原代胚细胞(RE)进行大鼠细小病毒的培养。