新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

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作   者：

华炯钢;  叶伟成;  倪征;  陈柳;  朱寅初;  云涛;  张存; 

作者机构：

浙江省农业科学院畜牧兽医研究所; 

关键词：

新型鸭呼肠孤病毒（NDRV）;  σC蛋白;  抗原表位;  单克隆抗体; 

期刊名称：

农业生物技术学报

i s s n：

1674-7968

年卷期：

2021 年 012 期

页   码：

2396-2406

摘   要：

新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus,NDRV）是近年来发现的一种新病原,可引起各品种鸭及鹅发病,给我国养鸭业造成巨大的经济损失。NDRVσC蛋白是主要的外衣壳蛋白之一,通过细胞受体介导使病毒吸附于宿主细胞,并诱导宿主机体产生型特异性抗体。为制备NDRVσC蛋白的单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）并鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达和纯化的重组σC蛋白免疫BALB/c小鼠（Mus musculus）,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组纯化的σC蛋白为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选出4株稳定分泌NDRVσC蛋白的McAbs杂交瘤细胞株A5-A1、A5-B6、A9-D4和B9-6。Western blot结果显示,4株McAbs均能识别NDRV全病毒和原核表达的重组σC蛋白;间接免疫荧光（indirect immunofluorescence assay,IFA）结果显示,4株McAbs均与NDRV呈阳性反应,与经典鸭呼肠孤病毒（Classical duck reovirus,CDRV）和禽呼肠孤病毒（Avian reovirus,ARV）呈阴性反应。利用人工合成相互重叠的多肽库和一系列截短多肽,对4株McAbs识别的抗原表位进行鉴定,结果表明,3株单抗A5-A1、A5-B6和B9-6识别的核心抗原表位均为177PILSGPADA185,A9-D4单抗识别的抗原表位可能呈空间构象。抗原表位的保守性分析表明,该抗原表位在不同地域和不同宿主来源的NDRV分离株中具有很高的保守性。上述结果表明,177PILSGPADA185是NDRV的型特异性B细胞线性表位。本研究为深入探讨σC蛋白结构和建立NDRV临床检测方法提供基础资料。