极小种群野生植物十万大山苏铁SSR和ISSR反应体系建立及引物筛选

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作   者：

秦惠珍;  杨秀德;  唐健民;  邹蓉;  朱成豪;  韦霄;  蒋运生;  熊忠臣;  唐凤鸾; 

作者机构：

广西中国科学院广西植物研究所; 

关键词：

SSR-PCR;  引物筛选;  十万大山苏铁(Cycas shiwandashanica);  反应体系;  ISSR-PCR; 

期刊名称：

分子植物育种

i s s n：

1672-416X

年卷期：

2022 年 20 卷 008 期

页   码：

2689-2698

摘   要：

为筛选出适用于极小种群野生植物十万大山苏铁的SSR引物和ISSR引物,建立十万大山苏铁的SSR-PCR和ISSR-PCR反应体系,本研究以十万大山苏铁为试验材料,用改良CTAB法提取其基因组DNA,采用L16(43)正交设计方法,探索2xTaqMix、引物浓度和模板DNA含量3个指标参数对十万大山苏铁SSR-PCR和ISSR-PCR反应体系的影响.建立了相关优化体系:20μL的SSR-PCR扩增体系中2xTaqMix 10 μL、引物 0.4 μmol/L、模板 DNA25ng;20 μL 的 ISSR-PCR 扩增体系中含 2xTaq Mix 10 μL、引物 0.5 μmol/L、模板DNA 60 ng.结果表明,建立的反应体系及筛选出来的15对SSR引物和9条ISSR引物通过了 21份十万大山苏铁样品验证,反应体系稳定可靠.