ω-转氨酶的筛选和异源表达用于制备S-甲氧基异丙胺

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作   者：

张涛;  周海胜;  徐佳琪;  杨立荣; 

关键词：

S-甲氧基异丙胺;  生物催化;  异源表达;  ω-转氨酶;  氨基转移; 

期刊名称：

生物学杂志

i s s n：

2095-1736

年卷期：

2024 年 41 卷 002 期

页   码：

8-15,56

摘   要：

根据转氨酶家族进化分类和底物特异性,构建一个包含 36 个ω-转氨酶的酶库;将酶库中的基因克隆进大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行异源重组表达,考察酶蛋白表达水平并测定相应的酶活以及对映体选择性.通过筛选,获得最佳的ω-转氨酶为来源于巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium的ω-转氨酶Bme TA,其重组表达粗酶活为2.0 U/mL,纯酶比活为9.5 U/mg蛋白;酶学性质表征发现其最适温度为35℃,最适pH为8.0.在此基础上进一步优化其催化反应工艺条件,在 20 g/L加酶量、0.5 mmol/L辅酶添加量以及 1.4 的氨基供体/氨基受体比例条件下,反应 18 h获得 450 mmol/L的S-甲氧基异丙胺,原料转化率达到 90%,为实现生物催化制备S-甲氧基异丙胺的工业化奠定基础.