m-R-34a通过激活lncRNA NORHA转录诱导猪卵巢颗粒细胞早期凋亡

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作   者：

王思琪;  周春雪;  李玉琦;  杜星;  潘增祥;  李齐发; 

关键词：

miR-34a;  saRNA;  NORHA;  猪GCs凋亡; 

期刊名称：

中国农业科学

i s s n：

0578-1752

年卷期：

2024 年 57 卷 005 期

页   码：

1000-1009

摘   要：

[目的]探索miR-34a诱导GCs凋亡的RNA激活机制,为揭示猪卵泡闭锁的分子机理、筛选调控母猪繁殖的小核酸调节物提供依据.[方法]利用生物信息学方法分析猪miR-34a特征及其与潜在靶基因lncRNA NORHA启动子的结合情况.利用核质分离技术分析猪GCs中miR-34a的亚细胞定位.QPCR检测miR-34a对猪GCs中NORHA、凋亡标志基因BCL-2和BAX表达的影响.利用荧光素酶活性分析验证miR-34a对NORHA启动子转录活性的靶向调控关系.利用染色质免疫沉淀(ChIP)检测mill-34a对猪GCs中NORHA启动子miRNA反应元件(MRE)处AG02和组蛋白修饰因子富集情况.利用western blot和流式细胞术分析miR-34a通过NORHA对下游因子FOXO1的表达和细胞凋亡的调控作用.[结果]猪miR-34a为基因间miRNA,其序列在哺乳动物中具有高度保守性.亚细胞定位分析显示,miR-34a在猪GCs中细胞核与细胞质均有分布.生物信息学分析显示miR-34a的MRE位于NORHA启动子-194 nt至-173 nt处,且两者结合自由能为-23. 9 kcal·mol-1.qPCR结果表明miR-34a显著上调猪GCs中NORHA的表达.荧光素酶活性分析显示,miR-34a极显著上调NORHA启动子报告载体活性,而对MRE突变型启动子活性没有显著影响.ChIP试验显示,miR-34a可增加NORHA启动子MRE处RNA诱导转录激活(RITA)复合物核心成员AG02和转录激活型组蛋白H3K4me3的富集,而减少转录抑制型组蛋白H3K9me3的富集.共转试验显示,敲减NORHA可显著或极显著逆转由miR-34a过表达引起的FOXO1蛋白水平和早期凋亡率的上调,以及BCL-2/BAX比值的下调.[结论]细胞核miR-34a是猪GCs中的内源性小激活RNA ( saRNA ),通过靶向激活促凋亡lncRNA NORHA的转录,诱导猪GCs早期凋亡(细胞膜完整),可能参与猪卵泡闭锁的启动.