王云峰，男，1967年3月出生于江苏省东台市，博士，研究员，博士研究生导师。现任兽医生物技术国家重点实验室副主任，中国畜牧兽医学会兽医生物技术分会秘书长，中国生物技术学会动物生物技术分会理事，中国畜牧兽医学会禽病学分会理事。中国免疫学会兽医免疫学分会、中国畜牧兽医学会传染病学分会等学会会员。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所学术委员会委员，兽医生物技术国家重点实验室学术委员会秘书。 学习和培训经历： 1987.9 -1992.7，就读于西北农业大学兽医系，获得学士学位； 1997.9-1999.7，就读于东北农业大学预防兽医学专业，获得硕士学位； 2002.9-2005.7，就读于中国农业科学院研究生院预防兽医学专业，获得博士学位； 2005.12-2008.6，东北农业大学兽医学博士后流动站，博士后研究。 2006.6-2006.7，参加中央农业干部培训班，进行农业部高级专业技术人员理论业务的培训。 主要科研工作经历： 1992.7-1995.12中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，SPF兔疫病监测，研习员； 1996.1-1999.5中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，细菌性疾病控制技术研究，助理研究员； 1999.6-2006.12 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，基因工程疫苗及鉴别诊断技术，副研究员； 2004.1至今兽医生物技术国家重点实验室，实验室日常管理，副主任； 2006年至今中国农业科学院三级岗位杰出人才 2007年1月至今中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，基因工程疫苗及细菌人工染色体研究，研究员；

研究方向

兽医微生物及其分子生物学

所在机构

名称：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 邮编：150001 地址：黑龙江省哈尔滨市南岗区马端街427号

主要成就

1、国家“863”项目“CAP18体外表达工程菌的构建与抗菌肽创制”，编号：2006AA10A206，2006.1 ~2010.12，50万，主持人，在研。 2、国家“863”项目“鸡痘病毒载体多价基因工程疫苗及禽流感等亚单位疫苗研制”，编号：2001AA213041， 2001.1~2003.12，105万，主持，已完成。 3、国家“863”项目“鸡痘病毒载体多价基因工程疫苗和禽流感等亚单位疫苗研制”，编号：2003AA213020， 2004.7~2005.12，90万，主持，已完成。 4、农业结构调整“H5N1亚型禽流感亚单位疫苗等新型禽基因工程疫苗研制”，编号：04-10-02B， 2004.6~2006.6，90万，负责人，已完成。 5、国家科技攻关项目“畜禽基因工程疫苗研制关键技术平台”，编号：2004BA519A51，2004.10~2005.12，130万，第一执行人，已完成。 6、畜禽重大疫病疫苗及配套技术的产业化研发，编号：无，2004.1-2006.12，300万，参加人，已完成。 7、北京市攻关“鸡新城疫、喉气管炎和鸡痘三联基因工程疫苗的研究”，编号：H030730011030，2003.7~2006.6，80万，第一执行人，已完成。 8、“973”项目“病毒致病基因及编码蛋白结构与功能研究”，2000.1~2004.12，177万，主要执行人，已完成。 9、黑龙江省攻关“偶蹄兽重要传染病基因工程疫苗的研究”，编号：GA02B501， 2002.7~2005.7，200万，主要执行人，已完成。 10、哈尔滨市科技攻关“传染性喉气管炎鸡痘重组疫苗产业化研究”， 2000.1~2002.12，负责人，已完成。 11、成果转化项目“鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒二价苗”， 2001.1~2003.12，第一执行人，已完成。 主要学术成绩 参加工作以来，一直从事畜禽传染性疾病的防控技术的研究工作，建立了兔病系列诊断技术、猪繁殖障碍疾病系列诊断技术，完成了兔巴氏杆菌病-波氏杆菌二联油佐剂灭活疫苗、鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗等疫苗研究。特别是在基因工程疫苗的研究方面，利用鸡痘病毒作为载体，建立了鸡痘病毒活载体疫苗研究的技术平台，构建了一系列重组鸡痘病毒，实现了多基因同时表达，并对重组疫苗进行安全评价，为禽传染病的防控和根除提供了可靠的技术支撑；近年来，主要进行细菌人工染色体及禽网状内皮组织增生症的研究，构建了鸡马立克氏病病毒、火鸡疱疹病毒等禽类疱疹病毒细菌人工染色体，为在体外更加快速有效地构建疱疹病毒载体疫苗，进行疱疹病毒等病原基因功能研究奠定了基础；对 REV的流行情况、变异规律进行研究有助于了解REV造成免疫抑制的真实情况，为该病的控制提供了理论依据。 一、重组鸡痘病毒疫苗的研究 将传染性喉气管炎病毒gB基因插入鸡痘病毒转移载体pSY681中，经筛选和纯化以后，获得能稳定表达gB基因的重组病毒。并在黑龙江省对传染性喉气管炎重组鸡痘病毒二价疫苗进行生产性试验；以黑龙江省和辽宁省为中心，在全国范围内进行了产品的区域试验，试验结果证明该疫苗免疫后不会引起鸡群的呼吸道疾病，免疫力持久、可靠，受到包括大连韩伟鸡场在的大型鸡场的欢迎，接到大量来自各地的大量垂询电话，取得了良好的示范效应和社会效应。2004年该疫苗获得突破性进展，在完成基因工程疫苗安全评价的基础上，通过熟化疫苗生产工艺，培训重组疫苗的生产、推广和使用人员，实现了疫苗的规模化生产，进行了广泛的临床测试，测试范围遍及全国的28个省市自治区，于2005年初获得新兽药证书，这是国内第一个成功应用于临床的禽用基因工程疫苗。“鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗”于2005年获得“黑龙江省科技进步一等奖”，2006年获得“国家科技进步二等奖”，还因为在鸡痘病毒载体疫苗上的突出工作，“鸡痘病毒载体系列基因工程疫苗的研制与应用”被大北农集团授予“第四届大北农科技奖励——科技成果奖”。 在传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗研究的基础上，对鸡痘病毒载体的功能进行扩展，建立了鸡痘病毒活载体疫苗研究的技术平台。构建了一系列重组鸡痘病毒，如表达传染性支气管炎病毒S1基因、共表达IBV S1基因和鸡γ-干扰素基因、共表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因、共表达传染性喉气管炎病毒gB-新城疫病毒F和HN基因重组鸡痘病毒、共表达传染性喉气管炎病毒gB和H9亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒等等。在现地完成了重组鸡痘病毒基因工程疫苗的中间试验、环境释放试验、生产性试验等阶段的安全性评价。 鸡痘病毒载体疫苗的研究是将现代分子生物学理论和基因工程疫苗研究理论应用于国内家禽传染性疾病的最初尝试，为全面开展动物基因工程疫苗的研究并将其应用于动物疾病防控实践提供了理论和实践依据，对其他的后续基因工程疫苗的研究提供了借鉴，特别是病毒载体疫苗安全评价体系的建立为后续产品提供了基础和参照。 二、 细菌人工染色体研究 鸡马立克氏病（Marek’s disease，MD）是危害养鸡业的主要传染病之一，由于MDV是严格的细胞结合病毒，对MDV基因组进行基因操作和研究十分困难，细菌人工染色体（Bacterial Artificial Chromosomes，BAC）技术的出现为解决这一难题带来了希望。BAC分子克隆化病毒服从大肠杆菌基因操作技术，在大肠杆菌中可以对其进行方便的基因操作和研究，利用近几年来发展起来的现代DNA克隆技术——RED/ET技术，可以在细菌中对病毒基因组实施快速有效的各种修饰（删除、插入和点突变），甚至对病毒基因组的必需基因进行有效的突变，对于MDV致瘤机制、病毒致弱、基因功能、载体疫苗等的研究具有重要意义。 自2002年开始，在对现有知识充分消化吸收的基础上，对现有技术进行创新，构建鸡马立克氏病病毒814株全基因组感染性分子克隆化病毒——细菌人工染色体，建立了鸡马立克氏病病毒的反向遗传操作技术平台。首先，利用自主构建的表达Eco-gpt的哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记（1.3kb）和带有细菌人工染色体基本基因功能序列（pBeloBAC11，7.5kb）构建了鸡马立克氏病病毒重组病毒转移载体pUAB-gpt-BAC11，使用脂质体转染技术，将转移载体与马立克氏病病毒感染CEF细胞的总DNA共转染鸡胚成纤维细胞，启动病毒感染后，在选择培养基的遗传选择加压条件下，经8轮筛选、富集并完全纯化了重组病毒；适时提取环化重组病毒感染CEF细胞的总DNA，电转化大肠杆菌DH10B，挑取阳性克隆经酶切图谱、凝胶电泳和PCR鉴定BAC分子克隆化病毒，经鉴定获得了38个BAC分子克隆化病毒，并且用编号为MDV-BAC2的克隆提取纯化的BAC-DNA转染次代CEF细胞，再次启动了病毒感染，产生了MDV特异性病毒蚀斑，拯救出了重组病毒；进一步研究表明重组病毒rv-MDV814、野生病毒wt-MDV814与拯救的重组病毒BAC-redrived MDV814三种病毒在体外鸡胚成纤维细胞上的生物学特性相似；进一步的动物试验研究表明rv-MDV 814、 BAC2-derived MDV 814、PBS-BAC2-DNA、Lip-BAC2-DNA、Ca-BAC2-DNA、活菌-BAC2免疫鸡部分能够抵抗J-1株强毒的攻击，表明BAC-based疫苗具有作为预防鸡马立克氏病新型疫苗进行开发的潜力。在此基础上，利用RED/ET技术将H5亚型禽流感病毒HA基因插入到马立克氏病病毒的基因组中，实现了外源基因的表达，SPF鸡体内试验证明，该基因在鸡体内也能正确表达，刺激机体的免疫系统产生免疫应答，对同源禽流感病毒株的攻击起到免疫保护作用。 本研究为进一步研究鸡马立克氏病病毒的致瘤机制、潜伏机制和基因功能提供了很好遗传操作技术平台，添补了国内空白，同时也为以马立克氏病病毒毒细菌人工染色体为基础的新型基因工程疫苗的开发和应用提供了强大的技术平台，并对诸如猪伪狂犬病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、牛鼻气管炎病毒、鸭疱疹病毒等大型DNA病毒基因结构和基因功能的研究起到推动作用，对于国内分子病毒学整体研究水平和研究实力的提高具有积极意义。 三、抗菌肽研究 随着传统抗生素的大量以及不正当使用，药物残留和菌株耐药性等问题变得越来越严重。研究与开发更为有效，同时对人、动物以及环境无害的现有抗生素的替代品是当今科研领域的研究热点。抗菌肽是生物体内经诱导产生的一类具有生物活性的小分子多肽，是宿主免疫防御系统的一个重要组成部分，具有广谱抗菌、抗真菌、原虫、带包膜的病毒及癌细胞等多种生物学功能，同时抗菌肽有着独特的抗菌机制，细菌不易产生耐药性。这些优点使得抗菌肽在替代传统抗生素方面显示了巨大潜力和广阔的应用前景。 CAP18是从兔嗜中性粒细胞中分离得到的一种大小为18kDa的抗菌肽，CAP18106-142是CAP18羧基端截短的37个氨基酸残基组成的功能性小片段，对G?和G+细菌都有抑制活性，具有独特的LPS中和活性，并且在许多极端条件下还能发挥其抗菌作用。因而CAP18106-142在临床上对脓毒血症以及内毒素休克的治疗具有良好的应用前景；可以作为一种新型的治疗药物，特别是针对一些耐药性的菌株；也可以作为辅助治疗药物与抗生素联合使用，治疗G?细菌引起的感染。本研究主要是根据抗菌肽CAP18活性片段CAP106-142的氨基酸序列，按照大肠杆菌密码子偏爱性，采用SOE技术，设计合成了CAP18的编码基因，经测序后与表达载体pET32a构建重组表达载体，经PCR和酶切鉴定正确后得到重组质粒p-cap；转化E.coli BL(DE3)后，经IPTG诱导，利用SDS-PAGE和Western blot确定了重组蛋白的表达。为了提高表达蛋白的产量，对常规表达条件进行优化，确定了最佳诱导条件。对纯化的融合蛋白初步活性鉴定表明，重组抗菌肽CAP18具有抑菌活性，为基因工程方法规模化生产抗菌肽CAP18106-142及其它贵重肽类奠定了理论与实践基础，对建立抗菌肽基因工程菌和抗菌肽研究的共性技术具有重要意义。 同时，通过本项研究，引入了一种复合自动诱导培养基，并对培养基中的关键成分进行了优化，得到了一种新型高效的复合自动诱导培养基（CAI-4），表达量与未优化的LB培养基相比提高了40倍以上，与条件优化后的相比也提高了16倍以上。为以大肠杆菌为表达体系的蛋白类制剂的规模化生产奠定了基础。 四、禽网状内皮组织增生症病毒的研究 禽网状内皮组织增生症是由网状内皮增生症病毒（Rrticuloendotheliosis Virus，REV）引起的鸡、火鸡、鸭、鹌鹑和鹅等以淋巴-网状细胞增生为特征的肿瘤性疾病，主要诱发鸡群的免疫抑制状态，没有明显的病理变化。由REV引起的免疫抑制状态可以给鸡群带来严重的影响，导致不同程度的继发感染、二重感染和多重感染，使疫苗的免疫力减弱。在集约化的养殖场中，因REV感染引起免疫抑制性疾病造成的经济损失已经成为影响养殖场经济效益的严重因素。 目前，我们已从以生长抑制为主要特征的病料样品中分离到8株禽网状内皮组织增生症病毒，这些病毒可以在鸡胚成纤维细胞上生长，但不能产生明显的细胞病变，细胞培养7天后经间接免疫荧光检测可以见到特异性的荧光出现。同时，我们根据REV囊膜糖蛋白最保守区设计一对引物进行PCR检测，结果表明分离的毒株与Genbank中报道的SNV株序列的具有较高的同源性，病毒序列的测定为了解和掌握该病毒在长期感染、流行传播过程中进化演变的规律，特别是病毒演化的分子流行病学提供客观指标。 完成了部分分离株对SPF鸡的致病试验，试验结果表明，分离到的毒株对SPF鸡具有致病性，临床可见生长缓慢，脱毛等症状。攻毒后能产生特异性抗体，并能检测出试验组与对照组之间细胞因子的变化。该模型的建立为REV的后续研究提供了理论基础。 在禽网状内皮组织增生症病毒中，由囊膜env基因编码的gp90蛋白是REV病毒的免疫原性蛋白，该蛋白的C-末端表位位于感染细胞的表面，含有顺序和构象表位，是病毒的免疫显性蛋白，同时该蛋白具有受体结合功能，是囊膜糖蛋白的表面蛋白，具有免疫原性，是REV的主要免疫原。将gp90基因连接到原核表达载体pET32（a）和杆状病毒表达载体pFastBac HT A中，已经完成各表达载体的鉴定和原核表达载体的诱导表达工作，该蛋白的获得将会为后期单克隆抗体的制备打下良好的基础，表达gp90重组杆状病毒的获得将会为后期REV检测方法的建立和疫苗的开发提供良好的技术平台。 五、其他研究 完成了兔多杀性巴氏杆菌病、波氏杆菌病、金黄色葡萄球菌病、魏氏梭菌病、兔病毒性出血症、兔轮状病毒性腹泻等8种兔病的血清学诊断技术，并成功地研制了用于兔巴氏杆菌病和波氏杆菌病预防用的“家兔巴氏菌、波氏菌灭活油佐剂二联苗”。其中，“琼脂糖免疫扩散试验诊断家兔支气管败血波氏菌感染”和“兔多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌感染二联油佐剂灭活疫苗”均获得了新兽药证书，1997年该项目被授予“农业部科技进步二等奖”，1998年被授予“国家科技进步三等奖”。 采用体外表达技术实现了猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪流感病毒等病原主要结构蛋白基因的表达，利用表达的重组蛋白作为抗原，研制了用于猪病毒性繁殖障碍疾病的鉴别诊断技术。研制了10余株针对猪繁殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白的单克隆抗体，利用所获得的单克隆抗体对这些结构蛋白进行了抗原表位分析；完成了SARS冠状病毒S蛋白部分抗原表位鉴定和表位作图工作。上述诊断技术均申请了国家发明专利，其中“表达猪繁殖与呼吸综合征病毒的重组伪狂犬病毒及应用”于2006年11月获得国家发明专利，同时“猪扁桃体采样器”获得了实用新型专利。2006年，“猪繁殖与呼吸综合症防制技术的研究与应用”和“猪繁殖障碍相关病毒系列重组抗原的研制及应用”分别被 黑龙江省人民政府授予“黑龙江省科技进步一等奖”和“黑龙江省科技进步三等奖”。 近5年主要论文、论著目录 2003年以来在高水平期刊杂志上发表论文69篇，其中SCI收录10篇，出版专著6部。

教育背景

1987.9 -1992.7，就读于西北农业大学兽医系，获得学士学位； 1997.9-1999.7，就读于东北农业大学预防兽医学专业，获得硕士学位； 2002.9-2005.7，就读于中国农业科学院研究生院预防兽医学专业，获得博士学位； 2005.12-2008.6，东北农业大学兽医学博士后流动站，博士后研究。 2006.6-2006.7，参加中央农业干部培训班，进行农业部高级专业技术人员理论业务的培训